1.體外培養的臍帶間充質干細胞對EDTA-0.25%胰酶消化比較敏感，胰蛋白酶的最佳活性溫度是37℃，消化時間3~5分鐘，消化過程中應注意控制消化酶作用的時間和溫度，消化3分鐘后應密切觀察細胞形態和脫落狀況，免疫細胞存儲避免消化過頭而導致細胞活性降低。一旦發現細胞收縮成圓形和晃動培養瓶有大量片狀細胞脫落時，應立即加入含20%血清的培養基終止消化，如果還有部分細胞貼壁，可采用吹打和敲擊瓶底的辦法使細胞脫落。如果還有部分細胞難以脫落的話，可先吸岀脫落細胞后再加少量消化液繼續消化或直接加入培養基繼續培養。

2.凍存細胞的離心洗滌過程也是影響細胞活性的重要因素，應盡量減少機械性損傷的可能因素，離心轉速和時間應針對不同實驗條件和不同的離心機摸索確定，以達到沉淀細胞為準，不宜轉速過高和離心時間過長，本實驗室采用的離心參數是400g離心10分鐘，洗滌次數不超過3次，一般2次即可。

3.凍存液對臍帶間充質干細胞的活性有一定影響，關鍵環節是凍存液的成分和質量、凍存降溫和復蘇過程及操作過程中對細胞的損害。臍帶間充質干細胞保存液通常是在DMEM/F12完全培養基的基礎上添加5%~10%的DMSO、2%白蛋白，加入SCF、 bFGF EGF等細胞因子有利于維持細胞活性，凍存管的細胞懸液不宜裝入過多，以免凍、融過程中膨脹后裂損而導致污染。

4.操作過程中應特別注意注明和核對標簽，確保凍存細胞的編號或標識前后一致。

5.人庫或提供臨床使用的臍帶間充質干細胞制劑必須無菌分裝，分裝容器必須無毒性、無污染，標明名稱、體積、數量、活性、批號、制備人等，同時留樣長期儲存被査，所有技術資料應完整和可溯源。

6.有條件的細胞制備實驗室，應建立細胞制備過程物聯網管理信息系統，實行全過程監督管理和信息資料可視化，盡可能避免差錯、遺漏。

7.復蘇時應從液氮中取出裝有細胞的凍存管后，立即置于40℃溫水中并注意晃蕩使其快速融化，融化過程中應保持適當距離，防止凍存管爆炸傷害眼睛等。融化后應用酒精棉球擦拭干凈凍存管，避免開蓋時外源水或雜質進入。融化后應立即進入洗滌程序，盡量減少干擾因素。

8.細胞接種密度影響傳代擴增的培養實踐，免疫細胞存儲采用1:3的比例，即相同面積的培養瓶以1瓶細胞傳為3瓶較為合適。靜置培養過程中應盡量不要晃動培養瓶，每次觀察細胞應小心輕放，注意觀察培養液的顏色變化和pH值改變，發現培養液變黃應及時換液，一般3天左右換1次。