【西安干細胞公司】臍帶間充質干細胞外泌體的鑒定及標準

2023-08-14 15:48:35

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外泌體的鑒定是繼分離后又一個困擾研究者的問題，一般研究者需要從三個不同的層面對外泌體進行鑒定：形態結構，大小，分子標記物。

從形態結構上來說，外泌體是30-150m大小的雙層膜性囊泡。西安干細胞公司研究者需要利用透射電子顯微鏡對所提取的外泌體進行觀測，典型的外泌體形態在電子顯微鏡下呈現通常為茶托形或一側凹陷的半球形的立體結構，大小在30~150mm，并進一步用免疫膠體

電子顯微鏡下的外泌體呈現茶托形(箭頭)，有時伴有非外泌體囊泡污染(三角)電鏡觀察外泌體形態操作流程為：取上述PBS懸浮液50u，向樣品中滴入染色劑醋酸鈾水溶液(1%，pH-=4.0)，混勻，用移液槍滴加1滴在復膜銅網上，自然干燥后在透射電子顯微鏡上進行觀察，并拍攝電鏡照片。

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從外泌體的粒徑大小來說，有三種方法都可以檢測所得外泌體的大小：電鏡，流式和納米顆粒追蹤技術(NTA)。有文獻報道比較了這三種不同的測量方法，西安干細胞公司發現NTA技術在外泌體粒徑檢測方面優于其他兩種方法。該技術的主要原理是納米顆粒在溶液中做布朗運動，小顆粒運動速度大于大顆粒，通過擴散系數，可以通過記錄每個顆粒的運動軌跡計算出來，并且是同時的，再通過托克斯-愛因斯坦方程計算出顆粒大小，根據所捕獲的散射激光信號測定顆粒濃度。利用NTA檢測技術分析所得外泌體的粒徑分布和濃度通常會得到實驗結果。

白特異性分子標記物的鑒定是外泌體鑒定的另外一個重要方面，可以采用流式、 western blot、質譜等方法來驗證。外泌體作為細胞外囊泡的一種，需要和其他細胞外囊泡進行區別現將外泌體、微囊泡、西安干細胞公司內體和凋亡小體的分類和特征列舉，將外泌體的蛋標志物進行分類，其中最常用的陽性標志物是CD9、CD63、CD81、Aix、hsp90、hsp70，同時選擇TAPA1作為陰性標志物。