UCMSO的復蘇應以很快的速度升溫，在1-2分鐘內達到恢復到常溫水平，防止細胞內形成冰結和高濃度電解質而對細胞造成損傷。由于DMSO在常溫下對細胞有一定毒性作用，復溫后的細胞懸液立即處理，通過離心洗滌盡快去除DMSO。冷凍保護的效果與冷凍速度冷凍溫度和復蘇溫度有密切關系，西安臍帶干細胞存儲只要操作得當，復蘇后的 UCMSC仍然保持其正常的結構與功能，體外生長特性不發生明顯改變。 UCMSC的復蘇方法如下：

1.在實驗內預先準備40℃水浴(用100ml塑料燒杯裝40℃溫水50m1)鑷子(用于轉移凍存管)、loml離心管、0.9%的生理鹽水、DMEM/F12培養基、胎牛血清或人臍血血清、SCF、EGF、bFGF、吸管、移液管、一次性吸頭、培養瓶等。

2.從液氮中取出裝有細胞的凍存管，立即放入溫水中，輕輕搖晃使凍結細胞在2分鐘左右融化。為保證細胞的活性，可將凍存管置于-80℃冰箱中放置30分鐘，使液氮蒸發后再轉入溫水中，同時避免凍存管爆裂危險。

3.將融化后的細胞迅速轉移至超凈工作臺，西安臍帶干細胞存儲用酒精棉球將凍存管擦拭干凈，用吸管將細胞懸液轉移到離心管中，加入5ml預熱至37℃的培養液，加入1ml培養液至凍存管中沖洗管壁并轉移至離心管中，反復沖洗2次，輕輕振蕩混勻試管內的細胞懸浮液。

4.300g離心10分鐘，用吸管去除上清，加入3m完全培養基，輕輕震蕩或吹打使細胞重懸混均勻。

5.計數活細胞數量和比例，將細胞懸液接種于T75塑料培養瓶中，加入20ml完全培養基。

6.搖晃培養瓶使細胞均勻分布于瓶底，將細胞置于37℃、5%CO2飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。

7.每3天觀察細胞生長情況并換液，也可在第2天細胞貼壁后換1次液，好處是可以去除死細胞及其對正常細胞的影響。待細胞生長至80%~90%融合時收集細胞，西安臍帶干細胞存儲按常規棄培養上清，用平衡液或生理鹽水洗滌，胰酶消化，離心洗滌，計數活細胞，用完全培養基稀釋，按1:3的比例接種于新培養瓶中進行傳代培養，收集1瓶 UCMSC后，接種于3個相同面積的新培養瓶。

8.傳代培養后的 UCMSC生長速度遠快于原代 UCMSO，一般45天即可達到80%~90%的細胞融合度，此時可繼續收集繼續傳代培養或凍存。