臍帶間充質干細胞的鑒定，根據國際細胞治療協會提出的“間充質干細胞的標準”，從臍帶分離獲得的細胞是不是間充質干細胞，必須從細胞生長特性、形態學特征、免疫表型標志、分化潛能甚至生物學功能等諸多方面檢測鑒定。

臍帶間充質干細胞生長特性及形態特征鑒定

(一)臍帶間充質干細胞的生長特性檢測

1.原理運用改良的MT法，通過比色來檢測臍帶間充質干細胞的活性，造血干細胞存儲并繪制生長曲線，計算出群體倍增時間。

2.試劑和儀器MTX檢測試劑盒、96孔組織板、酶標儀。

3.步驟取對數生長期的臍帶間充質干細胞，胰酶消化成單細胞懸液，PBS離心洗滌三遍后，計數，按照2×10}孔接種96孔板,100山/孔，置于5%CO2、37℃的培養箱中靜置培養。每隔24小時，每孔加入20μMTS孵育2小時后，用酶標儀(490m)測定各孔吸光度值，連續觀察10天后，以時間為橫軸，吸光度值為縱軸繪制生長曲線。

4.結果分析標準的生長曲線近似S形，細胞剛接種前2天處于滯留期，增殖不明顯：3-~7天進入對數增殖期，細胞生長旺盛，活力最佳；第8天進入平臺期。在生長曲線上細胞數量增加一倍時間為細胞倍增時間，可以從生長曲線上面換算出，細胞倍增時間即細胞對數生長期，按照細胞倍增時間計算出群體倍增時間(DT)。DT=T×[lg2g(N2∧Nt)]，T代表生長曲線中的對數增殖時間段(12~1)，N是對數增殖期起始時間拐點的細胞數，N2是對數增殖末期的細胞數。

(二)臍帶間充質干細胞的細胞周期檢測

1.原理細胞內的DNA含量隨著細胞周期進程發生周期性的變化，造血干細胞存儲利用P標記的方法，利用流式細胞儀，將待檢測的臍帶間充質干細胞放入樣品管中，在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細胞排成單列進行逐個檢測，得到該細胞的光散射和熒光指標，可以分析出細胞的DNA的含量以及各周期各時相的百分比。

2.儀器和試劑流式細胞儀、離心機、水浴、冰箱、70%乙醇(保存于4℃)， RNase-A(-20℃保存)、PI、PBS。

3.步驟分別取三組對數生長期的臍帶間充質干細胞，胰酶消化成單細胞懸液，每管各1×10°個，PBS洗滌2次，用力打入5m70%(預冷)乙醇中，封口膜封口4℃過夜。PBS洗2次，用04ml的PBS重懸并轉至Tbe中輕輕吹打，加入 RNase-A約3，水浴消化30分鐘，加P約50u，在水浴中避光染色30分鐘后流式細胞儀進行檢測。通過 Multcycle-AV軟件記錄分析細胞周期結果。實驗重復3次，取平均值。

4.結果分析細胞周期分析表明,80%的細胞處于G0~G1期，表明臍帶間充質干細胞有絲分裂旺盛，增殖能力強。

(三)臍帶間充質干細胞的形態特征觀察

在倒置相差顯微鏡下，可以觀察到原代培養的細胞少數長梭形貼壁生長的細胞組織塊周圍爬出，逐漸發展到圍繞組織塊呈克隆狀生長。傳代后可以觀察到大量成纖維細胞樣細胞呈漩渦狀密集排列生長，呈現明顯的方向性顯示出典型的細胞形態特征。

總之， 造血干細胞存儲UCMSO生長特性及細胞形態特征反映了其生物學特性，如果細胞培養過程中出現生長貼壁困難，生長速度緩慢，胞體增寬并在細胞內有較多黑色顆粒或脂肪滴，甚至出現凋亡小體或上清液中有較多細胞碎片，表明細胞老化和細胞活性較差，不宜用于實驗研究。