間充質(zhì)干細(xì)胞表型標(biāo)志鑒定是細(xì)胞質(zhì)量鑒定的核心內(nèi)容，是直接決定細(xì)胞究竟是不是間充質(zhì)干細(xì)胞的判定標(biāo)準(zhǔn)之一。 UCMSC可表達(dá)多種抗原標(biāo)志蛋白分子,4~8代的 UCMSO表面標(biāo)志較為穩(wěn)定，可表達(dá)CD10、CD13、CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166及MHC-Ⅰ等細(xì)胞標(biāo)志，低量表達(dá)移植相關(guān)的表面標(biāo)記CD80、CD86和HLA-ABC，不表達(dá)CD14、CD31、CD33、CD34、CD45、CD56及HLA-Ⅱ類分子，免疫細(xì)胞存儲也不表達(dá)共刺激分子，可以逃逸異體的T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的識別而在異體甚至異種體內(nèi)長期存活。這些特性為它們作為組織工程的種子細(xì)胞提供了強(qiáng)大的理論根據(jù)，為自身免疫性疾病、器官移植及各種替代治療方面的潛在應(yīng)用價(jià)值提供了有力的支持。 UCMSC的免疫表型分析主要采用流式細(xì)胞分析術(shù)，也可采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法。這里主要介紹流式細(xì)胞分析術(shù)。

1.原理采用流式細(xì)胞分析術(shù)對 UCMSC進(jìn)行表型分析的基本原理是根據(jù) UCMSC表達(dá)于細(xì)胞表面的標(biāo)志分子，選取相應(yīng)的熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行特異性結(jié)合反應(yīng)，然后通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，從而計(jì)算出表達(dá)某種特定標(biāo)志分子的細(xì)胞數(shù)量和比例。由于 UCSC缺乏特異性的表面標(biāo)志分子，不能以單一的標(biāo)志分子作為判定指標(biāo)，免疫細(xì)胞存儲需要選取一組或系列分子標(biāo)志物作為檢測指標(biāo)，根據(jù)多種標(biāo)志物的表達(dá)情況進(jìn)行綜合判定。對 UCMSC進(jìn)行表型分析，實(shí)際上也是評價(jià)其是否具有干性和檢測其純度。基本方法是通過加入熒光標(biāo)記的表面標(biāo)志物抗體孵育后，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測表面抗原情況。比如在人 UCMSC表型分析中，常用的陽性標(biāo)志分子有：CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166及MHC-I，陰性標(biāo)記常選用CD45和CD34等。

2.主要試劑和儀器流式細(xì)胞儀、熒光標(biāo)記抗體、磷酸鹽緩沖液。

3.操作步驟取體外培養(yǎng)的第三代(P3)的 UCMSC，棄除培養(yǎng)基，胰酶消化，生理鹽水離心洗滌3次，計(jì)數(shù)活細(xì)胞，稀釋并分裝于孵育反應(yīng)管中,1×10°個(gè)細(xì)胞/管，分別加入CD29-FITC、CD34-PE、CD44-FITC、CD45-PC5、CD90-FITC、CD105-PE和同型對照10ul，4℃避光孵育30分鐘，磷酸鹽緩沖液洗滌棄除未結(jié)合抗體后，按照流式細(xì)胞儀的操作程序進(jìn)行表面抗原標(biāo)志分子的表達(dá)分析。

4.結(jié)果分析采用流式細(xì)胞分析技術(shù)表明臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞CD90、CD29、CD105和CD44呈陽性，陽性率不低于95%，CD45和CD34呈陰性，表達(dá)不高于2%，免疫細(xì)胞存儲且同型對照均為陰性，從臍帶分離出來的原代細(xì)胞PO通過傳代除去雜細(xì)胞后，P3的陰性標(biāo)志的細(xì)胞越來越少，而陽性標(biāo)志的細(xì)胞越來越多，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞得到純化(圖6-4)。

5.質(zhì)量控制同型對照均為陰性的情況下所得到結(jié)果才真實(shí)可靠。