【免疫細胞存儲】hUCMSC注射液的質量檢驗（二）

2024-03-06 17:43:51

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4.細胞純度和均一性檢驗對于經過數代培養的 hUCMSC，免疫細胞存儲應進行無污染檢查，以保證未被其他類型細胞污染；或通過檢測細胞表面標志物的方法，對制劑進行細胞純度或均一性的檢測。

免疫細胞存儲

5. hUCMSC表面標志檢驗可以通過流式細胞儀或細胞免疫化學法檢測，各個hUCMSC制備實驗室可根據自己的實際情況選擇適合自己的檢測方法，下面以流式細胞儀為例說明具體操作方法：免疫細胞存儲一般選擇處于對數生長期的P3-P5代細胞，胰酶消化細胞，完全培養基終止消化，吹打均勻，充池計數，一般取1×10個細胞為1~2個細胞表面標記檢測用量，加入PBS充分洗滌3次，分別加入熒光標記的表面抗體避光4℃孵育30分鐘或者避光室溫孵育20分鐘，加入PBS充分洗滌1次，上流式儀檢測。臍帶間充質干細胞是一群異質細胞，沒有一個固定的表面標記物，一般選擇CD29、CD34、CD45、CD90、CD106、CD105這幾個經典指標進行檢測，已知臍帶間充質干細胞CD29、CD44、CD90、CD106、CD105呈陽性，且陽性率不低于95%，CD34、CD45、HLA-DR呈陰性，免疫細胞存儲陽性率不高于2%；P3代以內的細胞表面標記物表達隨著代次的增加陰性標記越來越少，陽性標記越來越多。

6.核型觀察檢驗 hUCMSC經過長期的體外培養，染色體核型分析結果應顯示其核型為正常核型(46，XXXY)且無易位、倒位、缺失、復制和融合等異?，F象，證明 hUCMSC的核型穩定。