【造血干細胞存儲】?細胞分化功能檢驗

2024-03-12 15:10:14

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(1)成脂誘導分化:

1)誘導方法：收集待檢的 hUCMSO，按照1×103cm2接種到12孔板中靜置培養，至到細胞100%甚至過度融合時，吸去10%FBS的 DMEM/F12培養基，加入成脂分化誘導培養液，每3天換液1次，誘導培養14天后,4%多聚甲醛固定30分鐘后染色，顯微鏡下觀察拍照。

2)檢測方法(油紅0染色)成脂肪誘導的過程中，造血干細胞存儲細胞在胞質中不斷有滴的累積，并不斷的增加變大，zui后整個細胞的胞質中都是油滴。油紅O染色的方法是對油滴的染色的一種方法。

造血干細胞存儲細胞

(2)成骨誘導分化

1)誘導方法：收集待檢的 hUCMSC，按照5×101m2接種到12孔板中靜置培養，至細胞60%~70%融合狀態時，吸去10%FBS的 DMEMF2培養基，加入成骨分化誘導培養液，每3天換液1次，誘導培養21天后,4%多聚甲醛固定30分鐘后染色，顯微鏡下觀察拍照。

2)檢測方法：(茜素紅染色)成骨誘導過程中鈣離子以鈣鹽的方式沉淀下來，形成“鈣結節”，造血干細胞存儲細胞茜素紅和鈣發生顯色反應，產生一種深紅色的帶色化合物，這樣成骨誘導的細胞外沉積的鈣結節也就被染成深紅色。

(3)成軟骨誘導分化:

1)誘導方法：收集待檢的 hUCMSC，調整細胞濃度為1.6×107ml，造血干細胞存儲細胞取5山接種12孔板中，靜置于37℃,5%CO2培養箱中培養2小時，緩慢加入成軟骨分化培養基靜置培養，每3天換液1次，培養14天后,4%多聚甲醛固定、石蠟包埋軟骨小球病理切片，脫蠟后染色，顯微鏡下觀察拍照。

2)檢測方法：(阿利辛藍染色)檢測軟骨細胞分泌基質中的葡萄糖胺聚糖，可使軟骨中硫酸軟骨素、硫酸膠質素等主要成分呈現藍色。